Bạn đang xem bài viết Hô Biến Pcr Thành Real được cập nhật mới nhất trên website Channuoithuy.edu.vn. Hy vọng những thông tin mà chúng tôi đã chia sẻ là hữu ích với bạn. Nếu nội dung hay, ý nghĩa bạn hãy chia sẻ với bạn bè của mình và luôn theo dõi, ủng hộ chúng tôi để cập nhật những thông tin mới nhất.
Trong bài viết hôm nay, tôi sẽ mổ xẻ từ “ĐƯỢC” trên, nghĩa là những yếu tố bạn cần có để chuyển đổi nhanh chóng một phản ứng PCR thông thường thành Real-time PCR trong vòng…7 nốt nhạc! 🙂
Cách sử dụng EvaGreen cũng khá đơn giản. Ống EvaGreen bạn mua về thường có nồng độ cao, 100X. Bạn chỉ việc hút 1 lượng thể tích nhỏ bổ sung vào phản ứng PCR của mình sao cho nồng độ cuối của EvaGreen vào khoảng 0.5X – 1X là được. Ví dụ, nếu tổng thể tích phản ứng PCR của bạn (tính luôn lượng DNA cho vào) là 25 μl, bạn chỉ cần hút 0,25 μl EvaGreen 100X cho vào ống phản ứng để được nồng độ cuối là 1X.
Vậy thì, tại sao bạn phải chạy thêm bước phân tích Melting Curve này? Câu trả lời là: “Để biết tín hiệu huỳnh quang tạo ra từ phản ứng là do sản phẩm PCR đặc hiệu chứ không phải do primer dimer gây ra”.
Theo nguyên tắc, EvaGreen sẽ bám vào bất kỳ phân tử DNA mạch đôi nào có mặt trong phản ứng và phát ra huỳnh quang. Thế nên, cho dù phản ứng của bạn không hề có sản phẩm PCR đặc hiệu mà chỉ cho các primer dimer thì bạn vẫn sẽ thu được đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang tăng vọt vào những chu kỳ 35-40, và dẫn đến kết luận DƯƠNG TÍNH GIẢ! Để tránh trường hợp này xảy ra, bạn phải dựa trên kết quả phân tích Tm của tất cả các sản phẩm DNA mạch đôi có trong phản ứng. Tm của primer dimer thường rất thấp, khoảng 60-70oC, rất dễ phân biệt với Tm của sản phẩm PCR đặc hiệu, dao động trong khoảng 75-90oC.
Thứ tư, phải sử dụng tube 0,2 ml phù hợp với máy Real-time PCR. Vì đại đa số các máy Real-time PCR hiện có trên thị trường Việt Nam thường ghi nhận tín hiệu huỳnh quang xuyên qua nắp tube chứa phản ứng, nên bạn phải chắc chắn sử dụng đúng loại tube 0,2ml có nắp trong suốt (optical cap) chuyên dụng cho Real-time PCR.
Cuối cùng, ngoài lề một chút, tôi xin chia sẻ rằng với Real-time PCR sử dụng EvaGreen hay SYBR Green, bạn có thể nhân bản và phát hiện dễ dàng những đoạn gene rất ngắn, khoảng chừng 70-80 bp, điều rất khó thực hiện khi sử dụng PCR-Điện di thông thường (vì khó quan sát trên gel agarose). Tôi từng nhân bản và sử dụng phân tích Melting Curve để phát hiện thành công những đoạn DNA rất nhỏ này từ gene interleukin 28B của người trong đề tài nghiên cứu sinh của mình. Bạn chỉ cần có một chút kiến thức về sinh học phân tử để chọn được những vùng gene có Tm cao dùng cho thiết kế primer thì mọi chuyện sẽ trở nên rất dễ dàng.
7,900 total views, 9 views today
Viêm Xoang: Bệnh Lý Phổ Biến Về Hô Hấp
Viêm xoang bệnh gì?
Viêm xoang là tình trạng nhiễm trùng và viêm một hoặc nhiều xoang do xoang bị tắc nghẽn. Viêm xoang xảy ra đột ngột và chỉ kéo dài trong thời gian ngắn (khoảng 4 tuần) – viêm xoang cấp tính. Một trường hợp khác là viêm xoang có thể kéo dài (khoảng hơn 3 tháng) và lặp đi lặp lại gọi là viêm xoang mạn tính.
Những ai thường mắc phải bệnh viêm xoang?
Viêm xoang rất phổ biến, tất cả mọi người đều có thể mắc phải bệnh này. Bạn có thể hạn chế khả năng mắc bệnh bằng cách giảm thiểu các yếu tố nguy cơ. Hãy tham khảo ý kiến bác sĩ để biết thêm thông tin.
Những dấu hiệu và triệu chứng viêm xoang là gì?
Các triệu chứng chính của viêm xoang bao gồm:
Ho, đặc biệt ho nhiều hơn vào ban đêm;
Thấy bị đè nặng hoặc đau ở trán hoặc mặt;
Mũi bị nghẹt và chảy nước mũi, có dịch tiết ra màu xanh hoặc vàng xanh;
Các triệu chứng này thường khỏi sau 7 đến 21 ngày. Có thể có các triệu chứng khác không được đề cập. Nếu bạn có bất kỳ thắc mắc nào về các dấu hiệu bệnh, hãy tham khảo ý kiến bác sĩ.
Khi nào bạn cần gặp bác sĩ?
Bạn cần đi khám hoặc đưa trẻ nhập viện ngay nếu sau 1 tháng các triệu chứng bị viêm xoang vẫn còn hoặc có chiều hướng nặng hơn bao gồm:
Nguyên nhân gây ra viêm xoang là gì?
Nguyên nhân gây viêm xoang có thể là vi khuẩn, dị ứng, ô nhiễm hoặc polyp mũi (u lành tính ở mũi gây nghẽn). Bên cạnh đó, viêm xoang thường xảy ra sau khi bạn bị cảm lạnh, sau khi tiếp xúc gần (ăn, uống, hít phải hoặc chạm vào) chất gây dị ứng. Ngoài ra, viêm xoang mãn tính còn có thể do bẩm sinh bị hẹp xoang hoặc xoang quá khô.
Nguy cơ mắc bệnh viêm xoang
Có rất nhiều yếu tố có thể khiến bạn tăng nguy cơ mắc bị bệnh viêm xoang bao gồm:
Thường xuyên tiếp xúc với chất gây dị ứng hoặc môi trường bị ô nhiễm;
Bị rối loạn miễn dịch như nhiễm HIV/ AIDS, xơ nang…
Hút thuốc lá.
Điều trị
Những thông tin được cung cấp không thể thay thế cho lời khuyên của các chuyên viên y tế. Hãy luôn tham khảo ý kiến bác sĩ.
Những phương pháp nào dùng để điều trị viêm xoang?
Để giảm cảm giác khó chịu do bệnh gây ra, bạn có thể dùng thuốc xịt hoặc thuốc nhỏ trị nghẹt mũi. Đối với đau đầu nhẹ, bạn có thể dùng thuốc giảm đau thông dụng chứa paracetamol như Panadol hoặc Efferalgan.
Bác sĩ có thể chỉ định thuốc kháng histamin hoặc thuốc xịt mũi corticosteroid để giảm sưng. Phương pháp này cũng đặc biệt hữu hiệu trong trường hợp bạn nếu bạn bị polyp mũi. Đối với tình trạng viêm xoang do nhiễm khuẩn, bác sĩ sẽ chỉ định dùng kháng sinh. Ngoài ra, bác sĩ cũng sẽ tiến hành phẫu thuật cho bạn trong các trường hợp viêm xoang do nhiễm nấm, vách ngăn mũi bị lệch hoặc tình trạng polyp mũi tái phát.
Những kỹ thuật y tế nào dùng để chẩn đoán bệnh viêm xoang?
Bác sĩ sẽ khám tai, mũi và họng, đồng thời nghe lồng ngực của bạn qua ống nghe y khoa để chẩn đoán viêm xoang. Ngoài ra, bác sĩ cũng có thể nội soi mũi, chụp CT xoang hoặc chụp MRI nếu nghi ngờ bạn bị viêm xoang do nhiễm nấm hoặc do các khối u nào khác.
Để xác định nguyên nhân gây viêm xoang cho bạn, bác sĩ sẽ hỏi về số lần viêm xoang trong năm, những hoạt động bạn làm trước khi phát hiện triệu chứng và có thể đề nghị chụp X-quang hoặc thực hiện các thủ thuật xét nghiệm khác nếu cần thiết.
Phong cách sống và thói quen sinh hoạt
Uống nhiều nước để làm loãng dịch nhầy trong mũi.
Không uống rượu hoặc các chất có cồn.
Không hút thuốc lá.
Sử dụng gạc ấm để lên vùng xoang 4 lần một ngày, trong vòng từ 1 đến 2 giờ.
Tránh tiếp xúc với các chất gây dị ứng.
Không sử dụng các loại thuốc xịt mũi không được chỉ định. Những thuốc này có thể chứa chất không phù hợp với bạn và làm bệnh xấu đi.
Kê cao đầu vừa phải khi ngủ sẽ hạn chế tình trạng nghẹt mũi.
Chỉ một số ít trường hợp viêm xoang mạn không đáp ứng với điều trị thuốc, viêm xoang do tắc nghẽn hoặc viêm xoang có biến chứng nhiễm trùng lan rộng vào vùng hốc mắt, sọ não sẽ được chỉ định điều trị phẫu thuật. Do đó, bạn hãy đến gặp bác sĩ để được tham vấn thêm về phương pháp điều trị thích hợp.
Nếu bạn có bất kỳ câu hỏi nào, hãy tham khảo ý kiến bác sĩ để được tư vấn phương pháp hỗ trợ điều trị tốt nhất.
http://www.mayoclinic.org/diseases-conditions/acute-sinusitis/basics/definition/con-20020609?p=1 https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/000647.htm http://www.webmd.com/allergies/sinusitis-and-sinus-infection?print=true
Giới Thiệu Về Pcr Và Kỹ Thuật Realtime Pcr
– Kỹ thuật PCR: là kỹ thuật sinh học phân tử (SHPT) cho phép nhân bản một đoạn DNA mong muốn từ hệ gen DNA của cơ thể sinh vật thành nhiều bản sao. Kết quả chu kì cuối được phân tích bằng điện di.
Các sản phẩm của quá trình chạy PCR được gắn với huỳnh quang và dựa vào ngưỡng phát hiện huỳnh quang (sớm hay muộn) mà người làm thí nghiệm sẽ biết được số lượng DNA đích ban đầu có trong ống phản ứng.
Sau PCR, sử dụng điện di trên gel agarose/ thực hiện thí nghiệm lai với đoạn dò đặc hiệu để xác định sản phẩm khuyếch đại.
Biểu đồ 1: Biểu đồ khuếch đại
Biểu đồ 1: Biểu đồ một đường biểu diễn khuếch đại ghi nhận cường độ huỳnh quang phát ra từ ống phản ứng khi nhận được ánh sánh kích thích vào mỗi chu kỳ nhiệt
-Trục tung: biểu diễn cường độ huỳnh quang phát ra từ ống phản ứng khi nhận ánh sáng kích thích.
– Trục hoành: biểu diễn số chu kỳ nhiệt.
– Đường nền (baseline): được định nghĩa là số chu kỳ PCR trong đó tín hiệu huỳnh quang đặc hiệu tích lũy dần nhưng chưa đạt ngưỡng nhận biết của thiết bị. Theo mặc định, đường nền được xác lập trong khoảng chu kỳ 3 đến 15 và có thể được thay đổi.
– Cường độ huỳnh quang nền: TB cộng của cường độ huỳnh quang xuất hiện trong ống phản ứng trong 1 số chu kỳ đầu.
– Chu kỳ ngưỡng (Ct): là chu kỳ nhiệt mà ở tại thời điểm đó, thiết bị Realtime ghi nhận được tín hiệu huỳnh quang phát ra từ ống phản ứng bắt đầu vượt qua cường độ huỳnh quang nền.
Để real-time PCR xác định được chính xác số lượng bản đích ban đầu có trong mẫu thử, phải thực hiện real-time PCR các mẫu thử chứa các số lượng bản DNA đích ban đầu cần xác định số lượng cùng lúc với các mẫu chuẩn chứa số lượng DNA đích ban đầu đã biết rõ số lượng
Biểu đồ đường biểu diễn chuẩn – Standard curve
Đường biểu diễn vẽ lên mối quan hệ giữa chu kỳ ngưỡng với số lượng bản DNA đích ban đầu có trong các mẫu chuẩn được gọi là đường biểu diễn chuẩn.
Các loại hóa chất:
3.1. Chất phát huỳnh quang là một loại màu huỳnh quang chèn vào sợi đôi DNA(SYBR)
Cơ chế hoạt động:
– Khi chưa có sản phẩm khuyếch đại thì ống nghiệm không phát được huỳnh quang khi nhận ánh sáng kích thích.
– Nhưng khi có sản phẩm khuyếch đại thì SYBR 1 chèn vào và tập trung trên phân tử DNA làm cho ống phản ứng phát quang khi nhận ánh sáng kích thích.
SYBR Green I:
-Tính đặc hiệu không cao
– Tầm soát sản phẩm trước khi sử dụng probe đặc hiệu
– Thực hiện khi PCR đã được tối ưu hóa, không có primer dimer
Để khắc phục nhược điểm của SYBR I, sử dụng Melting Curve có thể phân biệt được sản phẩm khuyếch đại từ DNA đích hay từ dimer primer dựa vào nhiệt độ chảy
3.2.2 Beacon Probe
Cách đọc kết quả realtime-PCR
Kết quả định tính:
Mẫu dương tính:
Mẫu xét nghiệm
Mẫu chứng dương
Kết quả định lượng:
Mẫu dương tính dưới ngưỡng phát hiện
Mẫu dương tính: 1.25 x 105 copies/ml
– Kỹ thuật PCR định lượng được ứng dụng rộng rãi trong nghiên cứu, chẩn đoán và đánh giá hiệu quả của điều trị.
– Đánh giá sự biểu hiện của các gen trong tế bào ở mức độ RNA.
– Phát hiện và định lượng các tác nhân gây bệnh như vi khuẩn, virus và nấm phục vụ cho việc chẩn đoán và điều trị.
– Xác định đột biến gen với các cặp mồi đặc hiệu cho từng đột biến.
– Xác định các đa hình thái đơn (SNPs) với các cặp mồi đặc hiệu.
Phân Biệt San Hô Đỏ Tự Nhiên Thật Giả Trong Thành Phần Thất Bảo Chuẩn
San Hô Đỏ là 1 trong 7 loại BẢO VẬT QUÝ HIẾM mà nhà Phật thường dùng gồm có: Ngọc trai, Mã não, San hô, Hổ phách, Vàng, Bạc, Ngọc. Những vật phẩm quý hiếm này là sự kết tinh của vũ trụ, gọi là vô tạp chất nghĩa là nguyên chất. San Hô Đỏ có trường năng lượng lớn rất tốt cho gia trạch, tác dụng để trấn quỷ trừ tà, chiêu tài nạp phúc, an gia định trạch.
Lạt Ma Tây Tạng cũng dùng tràng hạt được chế tác từ san hô đỏ.
Tuyệt đối không sử dụng san hô trắng bởi vì san hô trắng có tính dụ tà và năng lượng thấp.
Trong kinh phật, san hô được gọi là Bát Bài Sa Phúc La, thuộc loại đá quý hữu cơ. San hô là một loài động vật ruột khoang sống dưới biển, chúng tiết ra chất Canxi Cacbonat, lâu ngày trở thành hình dạng như một bộ xương, bởi vì hình dạng của chúng giống như cành cây nên người xưa nhầm lẫn là thực vật và gọi là cây san hô.
San hô đỏ tự nhiên được Linh Phẩm Phong Thủy sử dụng trong thành phần bộ thất bảo chuẩn.
Để phân biệt san hô đỏ thật anh/chị có thể cắt ra, nếu bên trong có màu đỏ như bên ngoài, sờ vào ráp tay nhúng vào nước có màu đỏ thẫm hơn. Đưa lên mũi ngửi sẽ có mùi hơi tanh của san hô rất đặc trưng của san hô đỏ.
San hô đỏ cũng như các loại san hô khác thành phần chính đều là CANXI CACBONAT (đá vôi), vì vậy khi mài vào các bề mặt cứng thô giáp sẽ tạo ra một lớp bột màu trắng, đây là bột của đá vôi. Đặc tính này dùng để phân biệt với các loại vật chất giả san hô đỏ khác.
Để phân biệt san hô đỏ tự nhiên và san hô nhuộm màu, xử lý mầu anh/chị có thể ngâm mẫu thử trong dung dịch ACETON (dung dịch này có thể mua rất dễ tại các cửa hàng làm móng tay), Nếu mẫu thử làm nước ACETON chuyển từ không mầu sang mầu đỏ thì chứng tỏa mẫu đó đã được xử lý mầu. San hô đỏ tự nhiên không làm đỏ dung dịch ACETON.
THÔNG TIN LIÊN HỆ: LINH PHẨM PHONG THỦY
Cập nhật thông tin chi tiết về Hô Biến Pcr Thành Real trên website Channuoithuy.edu.vn. Hy vọng nội dung bài viết sẽ đáp ứng được nhu cầu của bạn, chúng tôi sẽ thường xuyên cập nhật mới nội dung để bạn nhận được thông tin nhanh chóng và chính xác nhất. Chúc bạn một ngày tốt lành!